文献类型： 中文期刊
第一作者： 张志刚
作者： 张志刚;张劲松;邹根;唐传红;冯杰;鲍大鹏;陈建波;谭贻
作者机构：
关键词： ‘沪农灵芝1号’;基因破坏;成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9);曲拉通X-100
期刊名称： 食用菌学报
ISSN： 1005-9873
年卷期： 2023 年 02 期
页码： 9-18
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 构建密码子优化的cas 9表达质粒pMD-EXP-cas 9，通过聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）介导转化灵芝（Ganoderma lucidum）菌株‘沪农灵芝1号’（‘Hunong No.1’）单核菌株L1，得到含有cas9完整表达盒的菌株L1-cas9。利用T7启动子构建靶向ura3基因的表达质粒psgRNA-1和psgRNA-2，体外转录后得到sgRNA 1和sgRNA 2。通过PEG介导的转化，将sgRNA 1和sgRNA 2转化进L1-cas9的原生质体中，得到ura3基因被破坏的突变体，首次在‘沪农灵芝1号’菌株单核体中构建成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein 9, CRISPR/Cas9)基因编辑系统，ura3基因的编辑效率为4个突变体（107个原生质体）。利用0.006%曲拉通X-100优化PEG介导的转化系统，可使ura3基因编辑效率提高至18个以上突变体（107个原生质体），本研究的结果为灵芝基因功能的研究和分子育种提供更高效的方法。
分类号： S567.31
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