家蚕RNAi效率相关核酸酶基因对RNAi效率的影响

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈咏琪

作者： 陈咏琪;尹延萍;冯嘉伟;白新宇;李庆荣;钟仰进;杨婉莹

作者机构：

关键词： 家蚕;RNA干扰;dsRNA;RNAi效率相关核酸酶;BmREase;dsRNA外切酶

期刊名称： 昆虫学报

ISSN： 0454-6296

年卷期： 2023 年 003 期

页码： 303-311

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】鳞翅目（Lepidoptera）昆虫消化系统存在的核酸酶是导致RNAi低效的主要原因之一，本研究旨在探索家蚕Bombyx mori RNAi效率相关核酸酶（RNAi efficiency-related nuclease, REase）BmREase对家蚕RNAi低效的影响。【方法】利用RT-PCR对家蚕BmREase cDNA全长序列进行同源克隆和生物信息学分析，并采用最大似然法进行系统发育分析；利用qRT-PCR检测BmREase在游走期家蚕不同组织（头、表皮、脂肪体、中肠、气管、马氏管和丝腺）中的特异性表达。通过向游走期家蚕注射BmREase,家蚕蜕皮激素受体（ecdysone receptor, EcR）基因BmEcR,超气门蛋白（ultraspiracle, USP）基因BmUSP和细胞因子sp?tzle1（BmSpz1）基因BmSpz1的dsRNA进行RNAi,分析干扰BmREase表达后是否可以提高靶基因dsRNAs的干扰效率。【结果】RT-PCR扩增得到家蚕BmREase（GenBank登录号：XM＿021350017.2）全长cDNA序列，其ORF长2 241 bp,编码746个氨基酸残基；生物信息学分析发现，BmREase与人核酸外切酶I 3qe9.1具有极其相似的结构，其Thr7, His33, Ala37, Arg93, Lys97, Tyr159, Asp160, Ser161和Asn174组成的活性结构域能够与核苷酸序列结合，暗示BmREase具有核酸酶活性。qRT-PCR结果显示，BmREase在家蚕游走期的中肠和马氏管中高表达，说明BmREase主要在家蚕消化系统中表达。在家蚕游走期注射dsRNA,BmREase的表达量比空白对照组的高，RNAi干扰BmREase提高了dsBmEcR, dsBmUSP和dsBmSpz1的干扰效率。【结论】家蚕体内存在与人类核酸外切酶相似功能的酶BmREase,其存在可能影响dsRNA在家蚕体内的干扰效果。本研究为利用RNAi进行家蚕基因功能的研究以及进一步开发RNAi防治害虫具有指导性意义。

分类号： S881.26

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