鸡DEC-205结合肽的筛选及体外鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 马孙婷

作者： 马孙婷;谭飞;王晓丽;马莉莉;徐彬;吕立新;冯志新;陈佩佩;欧阳伟

作者机构：

关键词： 鸡DEC-205;结合肽;噬菌体展示12肽库;液相淘选

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN：

年卷期： 2023 年 006 期

页码： 1270-1276

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为筛选鸡DEC-205的优势结合肽，以小鼠CD8α信号肽、鸡DEC-205具有结合作用的3个C型凝集素样结构域（CTLD-4、CTLD-5和CTLD-6）、人IgG1 Fc和His标签作为目的基因，设计构建重组表达质粒pcDNA3.1-DEC-205-Fc-his和pcDNA3.1-Fc-his（用于对照）;转染293t细胞，Western blot鉴定蛋白表达；镍亲和层析法纯化蛋白，用于噬菌体线性12肽库筛选结合肽，protein G/A交替进行了3轮液相淘选，对第3轮噬斑提取DNA测序并统计肽重复率。对重复率较高的短肽进行合成，ELISA及荧光显微镜观察鉴定肽与重组蛋白的结合效果。Western blot结果显示，转染重组质粒的293t细胞裂解液和细胞上清均可表达目的蛋白，DEC-205-Fc-his蛋白约90 kDa, Fc-his蛋白约35 kDa,与预期大小符合，纯化的蛋白作为靶标进行3轮淘选后，15条序列出现重复，其中DLPVNSVIFPFR（DL）重复率最高（达到6.41%）。ELISA及荧光检测结果显示，合成的DL短肽可结合表达DEC-205-Fc-his的细胞，与表达Fc-his的细胞亲和性较低。筛选获得的DL短肽经体外鉴定，结果显示是鸡DEC-205的潜在配体，相关结果将为研发鸡DEC-205新型靶向策略奠定基础。

分类号： S852.4

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