猪流行性腹泻病毒纤突糖蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 温颖

作者： 温颖;李青梅;乔松林;王丽;李睿;张改平

作者机构：

关键词： 猪流行性腹泻病毒;纤突糖蛋白;单克隆抗体;免疫过氧化物酶单层细胞试验

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2022 年 006 期

页码： 720-728

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备猪流行性腹泻病毒（PEDV）纤突糖蛋白（S）单克隆抗体，首先采用切向流超滤系统和凝胶过滤层析相结合的方法纯化PEDV CH/Hubei/2016毒株，免疫6～8周龄BALB/c小鼠，将血清抗体效价较高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合，通过免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）对杂交瘤细胞株进行筛选，对阳性杂交瘤细胞进行亚克隆获得PEDV单克隆抗体杂交瘤细胞株。利用PEDV S1区域重组蛋白对单克隆抗体进行酶联免疫吸附试验和Western-blot鉴定，经间接免疫荧光试验（IFA）和激光共聚焦扫描显微术（CLSM）进一步验证单克隆抗体与病毒的反应原性。结果显示，所获得PEDV S1蛋白单克隆抗体共有4株，分别命名为9B9H6、10G11、17H6B10和18E9G6。通过小鼠体内诱生法制备腹水，抗体的IPMA效价在2.56×10-4至1.024×10-5之间。IFA结果表明，4株单克隆抗体均可与PEDV感染的Vero细胞发生特异性反应。进一步通过CLSM发现，4株单克隆抗体可以指示PEDV感染Vero细胞过程中病毒新合成的S蛋白在内质网、内质网-高尔基体中间区域、高尔基体的亚细胞定位。PEDV S蛋白特异性单克隆抗体的成功制备，为PEDV感染机制研究和病原检测方法建立奠定了重要的分子基础。

分类号： S852.651

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