猪圆环病毒3型TB GreenⅡ实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用

文献类型: 中文期刊

第一作者: 李鹏

作者: 李鹏;孙延举;王寅彪;金前跃;梁晓晓;银梅;王选年;刘兴友;王利平

作者机构:

关键词: 猪圆环病毒3型;TB GreenⅡ;实时荧光定量PCR;常规PCR;病毒检测

期刊名称: 河南农业科学

ISSN: 1004-3268

年卷期: 2023 年 003 期

页码: 135-142

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 为建立猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)快速、灵敏且特异的检测方法,针对PCV3全基因组的保守区域设计特异性引物,构建标准质粒,通过优化反应体系和反应程序,建立基于TB GreenⅡ的实时荧光定量PCR(qPCR)方法,并对其特异性、敏感性、重复性和可行性进行验证。结果显示,建立的TB GreenⅡqPCR检测方法特异性良好,在4.74×102~4.74×107拷贝/μL的标准质粒间具有良好的线性关系(R2=0.999)。建立检测方法的最低检出限为10拷贝/μL,与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)无交叉反应,组内变异系数为0.33%~0.62%,组间变异系数为0.40%~0.73%。对收集的132份临床样品进行检测,PCV3 TB GreenⅡqPCR方法检出率为9.10%(12/132),高于PCV3常规PCR方法的检出率(4.55%,6/132)。综上,建立的PCV3 TB GreenⅡqPCR检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于临床样品中PCV3感染的诊断、流行病学监测和实验室研究等。

分类号: S852.651

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