非洲猪瘟病毒A137R蛋白单克隆抗体的制备与表位鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 向志达

作者： 向志达;李长尧;张涛清;张元峰;黄丽;杨玉莹;翁长江

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;A137R蛋白;单克隆抗体;抗原表位

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2022 年 44 卷 004 期

页码： 402-410

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)A137R蛋白鼠源单克隆抗体(MAb),本研究通过原核系统表达并纯化了重组A137R(rA137R),将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到2株能够稳定分泌A137R MAb的杂交瘤细胞株3D1和2C3.亚类试剂盒鉴定结果显示,两株MAb重链亚类均为IgG1,轻链亚类均为Kappa链.采用间接ELISA方法测得MAb 3D1和2C3的腹水效价均高于105,选取效价较高的MAb 3D1用于后续试验.采用western blot检测制备的MAb 3D1与293T细胞中过表达的A137R(不同剂量)及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)后(感染后不同时间)天然表达的A137R的反应性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测Mab 3D1与293T细胞中过表达的A137R的反应性.Western blot结果显示,过表达A137R的293T细胞出现了 15 ku左右的特异性条带,且随着转染质粒量浓度的增加,蛋白表达量增加;感染ASFV的PAMs中(感染后8 h)出现了 15 ku左右的特异性条带,且随着感染时间的延长,蛋白表达量增加.IFA结果显示,在过表达A137R的293T细胞中出现绿色荧光.以上结果表明,制备的MAb 3D1既能够与过表达的A137R反应,也能够与天然表达的A137R反应,反应性较强.将MAb 3D1用于激光共聚焦试验中检测ASFV感染PAMs后不同时间A137R的细胞定位;用于免疫共沉淀(Co-IP)试验中检测293T细胞中过表达的A137R和Flag-Agarose结合的反应性.激光共聚焦试验结果显示,ASFV感染PAMs后6h出现绿色荧光,且荧光主要在细胞质中,随着感染时间的延长,绿色荧光逐渐增多增强,表明A137R主要定位于细胞质中.Co-IP试验结果显示,Mab 3D1可以检测到结合在Beads上的A137R,出现约15 ku的特异性条带,表明Mab 3D1可以用于Co-IP试验.利用一系列表达部分重叠的重组A137R片段并经western blot鉴定两株Mab识别的表位;根据western blot结果合成一系列多肽并包被ELISA板,采用间接ELISA方法进一步筛选Mab识别的抗原表位,并利用western blot验证筛选到的抗原表位.结果显示,A137R氨基酸序列中的18NFHRCAWEE26和64AWHEVPECREFI75分别为Mab 3D1和2C3的抗原表位.本研究首次制备了 ASFV A137R蛋白的Mab,并进行了初步应用研究,还对其进行了表位鉴定,为进一步将该MAb利用于ASFV的检测和疫苗研究提供了实验依据.

分类号： S852.65

  • 相关文献

[1]非洲猪瘟病毒P30蛋白单克隆抗体制备、鉴定及阻断ELISA方法的建立. 张冯禧,肖琦,朱家平,尹力鸿,赵霞玲,严明帅,徐晋花,温立斌,牛家强,何孔旺. 2022

[2]非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备及线性抗原表位定位. 魏天,王成宇,王凤杰,李忠鹏,张芳毓,张守峰,扈荣良,吕礼良,王永志. 2022

[3]非洲猪瘟病毒A137R蛋白多克隆抗体的制备与应用. 向志达,张涛清,张元峰,黄丽,杨玉莹,翁长江. 2021

[4]非洲猪瘟病毒A137R蛋白的表达动力学与亚细胞定位分析. 孙茂文,周萍萍,王涛,李永锋,潘力,韩玉,孙元,杨玉莹,仇华吉. 2021

[5]非洲猪瘟病毒p72蛋白抗原表位预测分析及多表位疫苗的构建. 高瞻,邵军军,常艳燕,张光磊,孔洁,葛苏丹,常惠芸. 2020

[6]非洲猪瘟病毒K205R蛋白单克隆抗体的制备与鉴定. 赵亚茹,韩蓉,杨吉飞,牛庆丽,关贵全,罗建勋,刘光远,殷宏,■,刘志杰. 2019

[7]非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA抗体检测方法的建立. 周改静,罗俊聪,石正旺,万颖,杨波,曹丽艳,宋锐,田宏,郑海学. 2022

[8]非洲猪瘟病毒H240R蛋白单克隆抗体的筛选与鉴定. 张宁,丁培阳,任东娜,陈艺兰,李雪洋,常泽杰,李青梅,张改平. 2022

[9]非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备及鉴定. 吕璐,钟秋萍,于婉琪,谢振华,张萌,刘英楠,叶建强,秦爱建,扈荣良,陈宗艳,陈鸿军. 2022

[10]非洲猪瘟病毒pS273R蛋白水解酶单克隆抗体制备. 张萌,刘英楠,谢振华,敖清莹,吕璐,于婉琪,金文杰,秦爱建,扈荣良,陈鸿军. 2021

[11]非洲猪瘟病毒p30蛋白的真核表达纯化及单克隆抗体的制备. 刘靖,钟杰,陈伟业,王晗,张经伟,步志高,华荣虹. 2021

[12]非洲猪瘟病毒pA104R蛋白单克隆抗体的制备与应用. 王露露,皇甫皓月,席飞,张振江,Weldu Tesfagaber,张纪文,黄炼榆,李芳,步志高,赵东明. 2021

[13]非洲猪瘟病毒pI215L蛋白单克隆抗体的制备及其反应性研究. 许文杰,薛梦迪,张元峰,李长尧,黄丽,熊涛,翁长江. 2021

[14]抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体识别的抗原表位分析. 肖治军,张改平,杨汉春,杨艳艳,李学伍,邓瑞广,赵东. 2006

[15]猪肺炎支原体P97C末端蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位分析. 张美晶,王亮,李媛,董慧,姜海芳,陈超,曹培丽,郭丹,辛九庆. 2010

[16]猪圆环病毒2型特异性单克隆抗体的制备与鉴定(英文). 汪伟,王小敏,温立斌,何孔旺,周俊明,郭容利,王芳,倪艳秀,张雪寒,吕立新,俞正玉,茅爱华,李彬. 2014

[17]猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白B细胞抗原表位的鉴定. 周艳君,田志军,刘金霞,安同庆,彭金美,薛强,蔡雪辉,于海,李国新,刘娣,童光志,王云峰,王玫. 2009

[18]蓝舌病病毒3型VP5蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定. 孙晶,孙恩成,刘二战,孙亮,徐青元,杨涛,吴东来. 2014

[19]猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白羧基端抗原表位的鉴定. 周艳君,安同庆,刘金霞,贺云霞,仇华吉,王云峰,田志军,彭金美,童光志. 2005

[20]抗鸡贫血病毒结构蛋白单克隆抗体制备及其对应抗原表位分析. 王晓艳,高宏雷,高玉龙,程宇,王笑梅. 2007

作者其他论文 更多>>

微信小程序