双向转录/表达载体的构建及其在马流感病毒反向遗传系统中的应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张翔

作者： 张翔;郭巍;王晓钧

作者机构：

关键词： 双向转录/表达载体;EF1-α启动子;反向遗传学;病毒拯救;马流感病毒

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2016 年 38 卷 11 期

页码： 860-864

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为构建用于拯救流感病毒的双向转录/表达载体,本研究以p EF4/myc-His B为骨架首次构建了含有人源的EF1-α和pol I双启动子的载体p EZ,并通过报告基因证明其具有双向转录/表达的功能。此外,基于p EZ载体分别构建含有马流感病毒(EIV)A/equine/Jilin/1/1989(H3N8)(JL89)株各个节段c DNA的8个重组质粒,且其中HA节段通过点突变技术引入分子遗传标记(HindⅢ和NdeⅠ酶切位点)。将8个重组质粒共转染293T细胞,拯救出病毒(r JL89)。病毒滴度测定显示,拯救的第一代病毒具有较高的病毒滴度(2.38×105 TCID50/m L);序列分析表明,r JL89与JL89的各个节段的序列几乎一致性(99.9%~100%);酶切鉴定表明,r JL89稳定携带分子遗传标记(HindⅢ和NdeⅠ酶切位点);血凝效价测定表明,r JL89与JL89有相同的血凝效价(28);生长动力学研究显示,r JL89具有与JL89相同的生物学特性。以上结果证明,基于p EZ载体建立了EIV JL89株的8质粒反向遗传系统,该系统可以拯救出较高滴度的病毒。本研究将为进一步开展EIV分子生物学研究提供有效平台。

分类号： S852.652

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