甘蔗cDNA-SCoT差异显示分析PCR反应体系建立、优化及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吴凯朝

作者： 李杨瑞;杨丽涛;吴建明

作者机构：

关键词： 甘蔗;cDNA-SCoT;差异表达

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2013 年 05 期

页码： 892-898

收录情况： CSCD

摘要： cDNA-SCoT差异显示分析是应用于植物基因差异表达研究的一项新技术。本研究以甘蔗品种桂糖11号根尖为材料,提取总RNA并反转录第1链cDNA,对影响甘蔗cDNA-SCoT差异显示PCR反应的cDNA模板、SCoT引物、dNTPs、Taq DNA聚合酶和Mg2+等因子进行优化,建立甘蔗cDNA-SCoT反应体系,同时应用优化后反应体系分离25%PEG6000胁迫诱导甘蔗根尖差异表达基因片段。结果表明:各项因子均对PCR扩增效果存在影响,20μL反应体系中各因子的最佳含量如下:cDNA 80 ng、引物浓度1.0μmol/L、Taq DNA聚合酶2.0 U、dNTPs浓度200μmol/L、Mg2+浓度1.8 mmol/L。研究结果还显示,SCoT引物扩增多态性丰富,平均每条引物扩增条带30条,多态性条带比率为46.9%,6条引物分离得到PEG诱导甘蔗根尖特异表达片段45条,表明本研究所建立的甘蔗cDNA-SCoT反应体系具有操作简便、结果稳定、重复性好、成本低、多态性丰富等优点,可为甘蔗基因差异表达研究提供新的技术支持。

分类号： S566.1

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