抽提物处理供体细胞对克隆胚胎发育的影响

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郭芹芹

作者： 郭芹芹;范宗兴;郝海生;刘岩;赵学明;朱化彬;杜卫华

作者机构：

关键词： 爪蟾;卵母细胞抽提物;供体细胞;重编程;克隆胚胎

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2016 年 43 卷 02 期

页码： 477-486

收录情况： 北大核心

摘要： 本研究采用爪蟾卵母细胞抽提物处理和牛胎儿成纤维细胞(JBCFF),并以发生重编程的细胞为核供体进行体细胞核移植,研究其对克隆效率的影响。分别超排3只爪蟾,收集卵母细胞后提取其抽提物,用BCA蛋白浓度测定试剂盒确定其蛋白含量,SDS-PAGE分析其中所含蛋白的种类。应用细胞膜透化剂Digitonin对建立的JBCFF进行通透处理和PI染色,筛选最适浓度;并用获得的抽提物处理牛体细胞,获得重编程细胞。以发生重编程的体细胞为供体进行核移植,同时比较离子霉素+6-DMAP和A23187+6-DMAP两种组合激活后克隆胚的体外发育能力。结果,3个爪蟾卵母细胞抽提物样品的蛋白浓度分别为56.2255、64.6570和71.2158μg/mL,其中所含蛋白种类一致,主要集中在40~55、70~100ku之间。经过连续的筛选,透化剂Digitonin对JBCFF通透处理的最适浓度为7μg/mL,PI染色显示透化效率为55.44%。爪蟾卵母细胞抽提物与体细胞共孵育后继续培养6~7d,细胞聚集形成"克隆簇"。分别以"克隆簇"细胞和未处理细胞为核供体,制备的重构胚在融合率(92.83%和96.04%)、卵裂率(89.64%和89.78%)和囊胚率(24.06%和23.12%)均无显著差异(P>0.05);离子霉素+6-DMAP和A23187+6-DMAP两种激活方式对克隆胚胎的分裂率(92.16%和92.28%)和囊胚率(23.21%和24.18%)均无显著影响(P>0.05)。爪蟾卵母细胞抽提物诱导和牛体细胞发生重编程,并恢复到较低的分化状态,但没有显著促进克隆胚胎的体外发育,可见缺少对胚胎发育起重要作用的重编程过程,还需要继续深入研究。

分类号： Q813

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