基于截短绵羊鹦鹉热衣原体rMOMP183-390蛋白的间接ELISA检测方法建立与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 曲磊

作者： 曲磊;朱日宁;鞠安琪;魏天;肖丹;王成宇;王思月;张芳毓;王永志

作者机构：

关键词： 鹦鹉热衣原体;ompA基因;间接ELISA;待检血清;抗体检测

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2023 年 45 卷 007 期

页码： 710-715

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立绵羊鹦鹉热衣原体(Cp)间接ELISA抗体检测方法,本实验将编码Cp主要外膜蛋白MOMP的omp A基因序列按大肠杆菌密码子偏好性优化后,合成质粒pET-28b(+)-ompA,另外设计特异性引物,分别将omp A截短克隆至pET-28b(+)载体中构建重组表达质粒pET-28b(+)-ompA1-182和pET-28b(+)-ompA183-390,测序鉴定正确后分别转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导并纯化后,经western blot鉴定3个重组蛋白,结果显示,重组MOMP183-390蛋白(rMOMP183-90)表达效果最好.以rMOMP18-390作为包被抗原,采用方阵滴定法优化各反应条件,初步建立了检测Cp抗体的间接ELISA方法.采用建立的该方法检测羊痘病毒、布鲁氏菌、羊口疮病毒、小反刍兽疫病毒、口蹄疫病毒等羊临床常见病的阳性羊血清,结果显示,除Cp外,该方法与其他阳性羊血清均无交叉反应,特异性强;将Cp阳性血清2倍倍比稀释(1:50~1:6 400)后采用该方法检测,结果显示,当Cp阳性血清稀释达1:1 600时,仍可检测到抗体,敏感性高;批内、批间重复性试验结果显示,变异系数均小于10%.采用本研究建立的ELISA方法,以及间接血凝(IHA)试验和western blot分别检测随机选取的120份临床羊血清,结果显示该方法与IHA、western blot的总符合率分别为85%和91.67%;进一步采用建立的间接ELISA方法检测381份吉林省5家羊场的绵羊血清样品,结果显示阳性率为22.83%(87/381).本研究建立的绵羊Cp ompA重组截短蛋白的间接ELISA抗体检测方法敏感性高、特异性强、重复性好,为Cp临床样品检测及流行病学调查提供了可靠的技术手段.

分类号： S852.67

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