甘薯褪绿矮化病毒西非株系RT-LAMP检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 乔奇

作者： 乔奇;张振臣;秦艳红;张德胜;田雨婷;王爽;王永江

作者机构：

关键词： 甘薯;甘薯褪绿矮化病毒西非株系;逆转录环介导等温扩增技术;检测

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2013 年 46 卷 18 期

页码： 3939-3945

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】基于逆转录环介导等温扩增技术(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)建立甘薯褪绿矮化病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)西非株系(West African,WA)的可视化检测方法。【方法】针对SPCSV西非株系(SPCSV-WA)的CP核苷酸序列设计4条引物,以感染SPCSV-WA甘薯叶片总RNA为模板,进行一步法RT-LAMP,在65℃条件下反应1 h。扩增产物利用琼脂糖电泳分析和SYBR green I荧光染料显色判断结果,同时对扩增产物的电泳条带进行基因克隆和测序鉴定。利用常规RT-PCR和建立的RT-LAMP方法对14份甘薯样品进行SPCSV-WA检测,比较2种方法的检测结果。【结果】建立的LAMP方法可特异地对SPCSV-WA进行检测,且最低可检测出101拷贝/μL的模板。RT-LAMP产物的克隆测序表明,感染SPCSV-WA甘薯样品的RT-LAMP产物为SPCSV-WA CP基因序列。14份田间甘薯样品检测表明,RT-LAMP与RT-PCR方法检测结果完全一致。【结论】建立的SPCSV-WA RT-LAMP可视化检测方法,是简便、可靠的SPCSV-WA检测方法。

分类号： S435.31

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