文献类型： 中文期刊

作者： 张梦洁 ¹ ; 王佳婧 ¹ ; 何苗锋 ¹ ; 刘润春 ² ; 恽佳蕾 ² ; 李文良 ¹ ; 毛立 ² ; 张纹纹 ² ; 孙敏 ² ; 程子龙 ² ; 杨蕾蕾 ² ; 储岳峰 ³ ; 赵茹茜 ¹ ; 刘茂军 ¹ ;

作者机构： 1.南京农业大学动物医学院

2.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室

3.中国农业科学院兰州兽医研究所

关键词： 绵羊肺炎支原体;Enolase蛋白;原核表达;间接ELISA

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2021 年 012 期

页码： 1490-1497

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在建立一种检测绵羊肺炎支原体（Mo）血清抗体的间接ELISA方法,笔者构建了Mo Enolase基因原核表达载体,诱导表达后,纯化的重组蛋白用Western-blot分析其反应原性。以重组蛋白为包被抗原,建立了Mo间接ELISA抗体检测方法。结果显示,重组蛋白得到可溶性表达,Western-blot证实具有良好的反应原性。间接ELISA反应条件优化结果显示,包被抗原浓度为2 mg/L,37℃2 h,封闭条件为含10 g/L BSA的PBS,4℃过夜,待检血清稀释度为1∶50,37℃1 h,酶标二抗最佳稀释度为1∶4 000,37℃1 h,底物最佳显色条件为37℃避光10 min。分别利用38份阴性血清、38份阳性血清确定临界值为S/P=0.365。用该方法与间接血凝法对180份血清进行检测,两者符合率为81.11%。结果表明,本研究建立的间接ELISA方法敏感、特异,具有良好的临床应用前景。