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新型番鸭细小病毒Rep蛋白羧基端亚片段的原核表达及多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 胡非凡 1 ; 梁齐章 2 ; 黄瑜 2 ;

作者机构： 1.福建农林大学动物科学学院(蜂学学院)

2.福建省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 新型番鸭细小病毒;Rep蛋白;间接免疫荧光试验;免疫印迹试验

期刊名称： 福建农业学报

ISSN： 1008-0384

年卷期： 2023 年 008 期

页码： 889-893

收录情况： CSCD

摘要： 【目的】获得特异性识别新型番鸭细小病毒（New-genotype muscovy duck Parvovirus,N-MDPV）Rep蛋白羧基端亚片段的多克隆抗体。【方法】通过蛋白序列分析，选取N-MDPV Rep羧基端亚片段区域487～627 aa，后全基因合成序列，并在其C末端添加His-tag标签，利用无缝克隆的方法，将该段基因克隆至pET-28a（+）载体，随后转化Rosetta（DE3）大肠杆菌，诱导表达得到重组蛋白。利用镍柱亲和层析技术纯化表达重组蛋白，将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔，制备针对Rep蛋白羧基端亚片段的多克隆抗体。【结果】构建了pET-28a-Rep-487-627原核表达质粒，纯化表达了该重组蛋白。SDS-PAGE结果表明该重组蛋白分子大小约24 kDa，主要以可溶性形式表达。间接免疫荧光和免疫印迹试验表明制备的多克隆抗体能与细胞内过表达的N-MDPV Rep蛋白特异性反应。【结论】制备的Rep多克隆抗体具有良好反应特异性，可识别Rep蛋白的构象表位和线性表位，满足进一步研究的需要。

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[1]“短喙侏儒综合征”半番鸭病原学检测及病理组织学特征. 刘荣昌,黄瑜,卢荣辉,傅秋玲,万春和,傅光华,程龙飞,施少华,陈红梅. 2018

[2]一起番鸭感染新型细小病毒的诊断报告. 王艺萍,刘荣昌,黄瑜. 2019

[3]新型番鸭细小病毒的发现及其感染的临床表现. 黄瑜,万春和,傅秋玲,陈红梅,傅光华,陈翠腾,程龙飞,程小兵,施少华,林建生. 2015

[4]检测水禽源细小病毒的胶体金试纸条的研制. 程龙飞,张长弓,傅秋玲,何琼,贾志娟,陈慧敏,傅光华,万春和,林群群,刘荣昌,黄瑜. 2017

[5]半番鸭共感染鸭圆环病毒和新型番鸭细小病毒的诊断. 张瑞,刘荣昌,黄瑜. 2020

[6]猪圆环病毒4型Rep蛋白原核表达及多克隆抗体制备. 陈如敬,吴学敏,陈秋勇,严山,吴仁杰,车勇良,王隆柏,周伦江. 2023

[7]高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒间接免疫荧光鉴别方法的建立. 陈仕龙,黄梅清,林天龙,江斌,庄向生,陈少莺. 2009

[8]测鸭出血症病毒间接免疫荧光试验的建立. 黄瑜,程龙飞,李文杨,苏敬良,彭春香,庄向生,郭玉璞. 2003

[9]间接免疫荧光方法快速检测番鸭呼肠孤病毒病. 高春亮,蔡羲,朱小丽,陈少莺. 2012

[10]小鹅瘟病毒的分离鉴定及遗传变异分析. 江丹丹,林锋强,程晓霞,朱小丽,王劭,肖世峰,董慧,陈仕龙,陈少莺. 2021

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