文献类型： 中文期刊

作者： 王利平 ¹ ; 金前跃 ² ; 刘兴友 ¹ ; 王选年 ¹ ; 谭东鹤 ¹ ; 李鹏 ¹ ;

作者机构： 1.新乡学院生命科学与基础医学学院

2.河南省农业科学院

关键词： 猪瘟病毒;PCR-ELISA;荧光定量PCR;间接免疫荧光

期刊名称： 家畜生态学报

ISSN： 1673-1182

年卷期： 2023 年 44 卷 007 期

页码： 64-71

收录情况： 北大核心

摘要： 猪瘟(classical swine fever,CSF)是危害猪健康的重要传染病之一,具有急性、热性和高度接触性等特性,给世界养猪业造成了巨大的经济损失.PCR-ELISA 检测方法是在PCR和 ELISA 基础上创新的一种新技术,其灵敏性和准确性都高于单纯的 PCR 检测和ELISA检测.根据GenBank中猪瘟石门株序列,设计特异性引物,分别在 5'端标记生物素和地高辛,经过PCR扩增后,加入到包被有链霉亲和素的ELISA反应板上,然后通过DIG-HRP抗体进行显色反应,建立PCR-ELISA检测方法.结果表明:PCR-ELISA 最低检测到 1.81×104 拷贝/μL,普通 PCR 最低检测到 1.81×106 拷贝/μL,因此 PCR-ELISA 灵敏性比普通PCR高约 100 倍;对 27 份未知样品进行检测,普通 PCR 检测出阳性样品 15 份,阳性率为55.5%,PCR-ELISA检出 20 份阳性样品,阴性 7 份,阳性率为 74%,阳性检出率增加 18.5%;用建立的Real-Time PCR进行验证,检测结果与 PCR-ELISA 一致,两者的符合度为 100%;然后用PK15 细胞对普通PCR 未检测出的阳性样品进行病毒分离培养,通过间接免疫荧光(IFA)及普通PCR检测,结果显示该 5 份样品均为阳性.说明本研究所建立的 PCR-ELISA方法具有灵敏、特异、准确、快速、安全等优势,可应用于 CSFV 的快速诊断,为 CSFV 的流行病学监测提供有力保障.