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血橙果肉MYB转录因子的克隆与表达分析

文献类型： 中文期刊

作者： 夏荣娜 1 ; 李凛 1 ; 杨鑫 1 ; 王建辉 2 ;

作者机构： 1.成都理工大学生态环境学院

2.四川省农业科学院园艺研究所农业农村部西南地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室

关键词： 血橙;花青苷;CsMYB;原核表达;蛋白免疫印迹

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2020 年 28 卷 007 期

页码： 1211-1220

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 花青苷是一种高活性的黄酮多酚类化合物,广泛存在于各种植物中.MYB转录因子调控植物体内花青苷生物合成.本研究从血橙(Citrus sinensis)果肉中克隆了MYB转录因子,并进行生物信息学分析及基因表达研究;同时,构建原核表达载体PET28-CsMYB,所获得重组蛋白经新西兰大白兔(Oryctolagus cuniculus)免疫制备多克隆抗体,进而使用Western blot技术分别检测了不同样本之间MYB的差异表达.研究结果表明,血橙MYB型转录因子的核酸全长表达序列为789 bp,编码262个氨基酸,编码蛋白的1~56位与57~111位氨基酸分别具有MYB保守结构域R2和R3,将其命名为CsMYB(GenBank No.KT757348).将不同植物来源的MYB氨基酸全长序列进行多重比对分析并构建系统进化树,结果表明,CsMYB编码蛋白与已报道的荔枝(Litchi chinensis)花青苷调控蛋白(LcMYB1)聚在同一个进化支上,两个蛋白的氨基酸序列同一性为56.1%.对血橙不同组织进行基因差异表达分析,结果显示,CsMYB在果肉组织中高表达;同时参与花青苷生物合成与运输途径的查尔酮合成酶基因(chalcone synthase,CHS)与谷胱甘肽巯基转移酶基因(glutathione S-transferase,GST)在果肉中也呈现高表达;CsMYB基因表达随着果实发育与成熟而逐渐升高;与低花青苷含量的血橙芽变突变体比较,正常花青苷积累的果肉组织中CsMYB基因表达更高,并且CHS表达变化趋势与CsMYB一致.Western blot结果表明,只在血橙果肉样本中有36 kD的MYB蛋白杂交条带.综上所述,CsMYB可能参与调控血橙果肉花青苷的生物合成,本研究可为血橙果实着色机制研究与遗传育种提供参考依据.

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